常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理方式
1.收到常溫細(xì)胞后,及時(shí)拍照記錄有無(wú)漏液瓶身破損現(xiàn)象。
2.鏡下觀察有無(wú)微生物污染現(xiàn)象拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無(wú)染菌現(xiàn)象,方便后續(xù)售后處理。
3.消毒后,更換贈(zèng)送的完全培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2.3小時(shí)。如細(xì)胞有多數(shù)懸浮細(xì)胞需要高心收集重新接種止培養(yǎng)瓶。
4.觀察細(xì)胞密度若超過(guò)80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況決定),初次傳代推薦比例1:2到:(按實(shí)際收貨細(xì)
胞密度決定,若不確定可聯(lián)系技術(shù)支持)若細(xì)胞密度不到80%則可繼續(xù)培養(yǎng),注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋;懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基
以收集細(xì)胞。
5.由于氣溫運(yùn)輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的.請(qǐng)將細(xì)胞離心收集后在離心管中消化后進(jìn)行傳代,或及時(shí)聯(lián)系技術(shù)支持進(jìn)行指導(dǎo)傳代。
6.該細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基及血清的質(zhì)量要求較高,其中任何-一個(gè)質(zhì)量不好都會(huì)導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞的分化,特別是傳3、4代以后細(xì)胞容易出
現(xiàn)分化,細(xì)胞變大貼壁較緊呈典型”攤雞蛋”樣;
7.該細(xì)胞在傳代或復(fù)蘇后,剛貼壁時(shí)會(huì)有短小的突觸,但細(xì)胞胞體還是呈圓形或近圓形待細(xì)胞培養(yǎng)23天后,短小突觸會(huì)消失;
8.如果用胰酶消化經(jīng)驗(yàn)不足時(shí),極易導(dǎo)致后續(xù)細(xì)胞形態(tài)的改變也不容易將細(xì)胞消化下來(lái),
9.如果用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來(lái)容易導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡和細(xì)胞形態(tài)的改變也不容易分散為單細(xì)胞;
10該細(xì)胞不管在任何密度下腰是更換了新鮮培養(yǎng)基后緊接著進(jìn)行吹打細(xì)胞會(huì)很難從培養(yǎng)瓶壁,上脫落。
推薦的傳代方法有以下兩種:
方法一該細(xì)胞在細(xì)胞密度較大.培養(yǎng)基較黃時(shí),不要去除舊培養(yǎng)基用移液管直接對(duì)培養(yǎng)瓶壁上的細(xì)胞進(jìn)行吹打使細(xì)胞從壁上脫落。細(xì)胞
脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶也可收集培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液,離心后,棄上清再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后分瓶,進(jìn)行
培養(yǎng)。這種方法容易出現(xiàn)的問(wèn)題是如果操作者經(jīng)驗(yàn)不足可能導(dǎo)致部分細(xì)胞無(wú)法脫落。
方法二細(xì)胞密度達(dá)到80-90%,需要進(jìn)行傳代時(shí)可在培養(yǎng)瓶中的原培養(yǎng)基中滴加1- 2滴無(wú)菌的HEPES緩沖液視培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的體積適
當(dāng)可以增加HEPES*的用量)作用1-121min,使培養(yǎng)基PH變酸培養(yǎng)基顏色變黃,直接用移液管進(jìn)行吹打這時(shí)細(xì)胞會(huì)很輕易脫落并成單細(xì)
胞。細(xì)胞脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶;也可收集培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液高心后,棄上清,再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后
分瓶進(jìn)行培養(yǎng)。
